Emissionsspektrum

Dieser Effekt beruht auf der Überschneidung von Excitations- und Emissionsspektrum

This effect is due to the overlap of excitations and emission spectrum

?-Laktamase-Substrate der Formel (I) die bei Anregung Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer ("FRET") aufweisen, worin: eine der Gruppen X und Y ist ein als Energiedonor wirkendes Fluorophor und die andere ist ein als Energieakzeptor wirkendes Chromophor, wobei das Emissionsspektrum des Donors mit dem Absorptionsspektrum des Akzeptors überlappt und der Akzeptor Licht einer Wellenlänge absorbiert, das der Donor bei einer Anregung aussendet und wobei eine Hydrolyse des ?-Laktamase-Substrats durch eine ?-Laktamase zu einer Verringerung des FRET führt; R' ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus H, C -Alkyl, (CH ) OH, (CH ) COOR" und =NOJ, wobei n 0 oder eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist und J H, CH , CH COOH, CHCH COOH und C(CH ) COOH ist; R" ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus H, physiologisch verträglichen Metall- und Ammoniumkationen, -CHR OCO(CH ) CH , -CHR OCOC(CH ) , Acylthiomethyl, Acyloxy-alpha-benzyl, delta-Butyrolactonyl, Methoxycarbonyloxymethyl, Phenyl, Methylsulfinylmethyl, beta-Morpholinoethyl, Dialkylaminoethyl und Dialkylaminocarbonyloxymethyl, wobei R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H und C -Alkyl; A ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus S, O, SO, SO und CH ; Z' ist ein Linker für X; und Z" ist ein Linker für Y, wobei Z" eine direkte Bindung zu einem Sauerstoff-, Stickstoff- oder Schwefelatom in Y umfasst, oder ein Rest, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus -O(CH ) -, -S(CH ) -, -NR (CH ) -, -N R (CH ) -, -O C(CH ) -, -S(CH ) CONR (CH ) , -S(CH ) NR CO(CH ) und wobei m 0 oder eine ganze Zahl von 1 bis 4 ist und n 0 oder eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, oder -OCONR (CH ) -, -SCSNR (CH ) -, -SCSO(CH ) -, wobei n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist und R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus H und C -Alkyl, und membrangängige Derivate der Formel (1), worin wenigstens eine der Gruppen X und Y wenigstens ein acyliertes aromatisches Hydroxyl, ein acyliertes Amin oder ein alkyliertes aromatisches Hydroxyl enthält, wobei die Acylgruppe 1 bis 5 Kohlenstoffatome enthält und die Alkylgruppe ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -CH OC(O)alk, -CH SC(O)alk, -CH OC(O)Oalk, niederer Acyloxy-alpha-benzyl und delta-Butyrolactonyl, worin alk ein Niederalkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen ist.

?-lactamase substrates of the formula (I) exhibiting fluorescence resonance energy transfer ("FRET") when excited, wherein: one of X and Y is a fluorophore acting as an energy donor, and the other is a chromophore acting as an energy acceptor wherein the donor's emission spectrum overlaps the acceptor's absorption spectrum and wherein the acceptor absorbs light a wavelength that the donor emits when excited; and wherein hydrolysis of the ?-lactamase substrate by a (3-lactamase results in a decrease in FRET; R' is selected from the group consisting of H, C alkyl, (CH ) OH, (CH ) COOR", and =NOJ in which n is 0 or an integer from 1 to 5 and J is H, CH , CH COOH, CHCH COOH, and C(CH ) COOH; R" is selected from the group consisting of H, physiologically acceptable metal and ammonium cations, -CHR OCO(CH ) CH , -CHR OCOC(CH ) , acylthiomethyl, acyloxy-alpha-benzyl, delta-butyrolactonyl, methoxycarbonyloxymethyl, phenyl, methylsulphinylmethyl, beta-morpholinoethyl, dialkylaminoethyl and dialkylaminocarbonyloxymethyl, in which R is selcted form the group consisting of H and C alkyl; A is selected from the group consisting of S, O, SO, SO and CH ; Z' is a linker for X; and Z" is a linker for Y, wherein Z" comprises a direct bond to an oxygen, nitrogen or sulfur atom in Y, or a moiety selected form the group consisting of -O(CH ) -, -S(CH ) - , -NR (CH ) -, -N R (CH ) -, -O C(CH ) -, -S(CH ) CONR (CH ) , -S(CH ) NR CO(CH ) , and in which m is 0 or an integer from 1 to 4 and n is 0 or an integer from 1 to 5 or -OCONR (CH ) -, -SCSNR (CH ) -, -SCSO(CH ) -, in which n is an integer from 1 to 5 and in which R is selected from the group consisting of H and C alkyl and membrane-permeant derivations of the formula (I), wherein at least one of X and Y contains at least one acylated aromatic hydroxyl, acylated amine, or alkylated aromatic hydroxyl wherein the acyl group contains 1 to 5 carbon atoms and wherein the alkyl group is selected from the group consisting of -CH OC(O)alk, -CH SC(O)alk, -CH OC(O)Oalk, lower acyloxy-alpha-benzyl, and deltabutyrolactonyl, wherein alk is lower alkyl of 1 to 4 carbon atoms.

Ist das Emissionsspektrum des Hintergrundsignals bekannt, so kann durch Messung des Hintergrundsignals bei einer einzigen oder mehreren Frequenzen der Hintergrundvektor berechnet werden.

If the emission spectrum of the background signal is known, the background vector can be calculated by measuring the background signal at only one or a plurality of frequencies.

Ist das Emissionsspektrum des Hintergrundsignals bekannt, so kann durch Messung des Hintergrundsignals bei einer einzigen oder z.B. einigen wenigen Frequenzen der Hintergrundvektor berechnet werden.

If the emission spectrum of the background signal is known, the background vector can be calculated by measuring the background signal at a single or e.g. a few frequencies.