Ionenaustauschchromatographie

o Primäre Produktaufarbeitung (Ionenaustauschchromatographie; HIC; HPLC)

o primary product processing (Ion-exchange chromatography; HIC; HPLC)

Ionenaustauschchromatographie

Ion chromatography

Soliris wird in einem murinen Myelom-(NS0-Zelllinien-) Expressionssystem hergestellt und wird durch Affinitäts- und Ionenaustauschchromatographie gereinigt.

Soliris is produced in a murine myeloma (NS0 cell line) expression system and purified by affinity and ion exchange chromatography.

Verfahren zum Extrahieren und Aufreinigen von rekombinantem plazentarem Wachstumsfaktor (PLGF) in dimerer und multimerer aktiver Form, die nicht mehr als 1,5% der monomeren Form enthält, durch Expression in einem induzierbarem Expressionssystem in modifizierten prokaryontischen Zellen, umfassend die folgenden Schritte: I) Fermentation der prokaryontischen Zellen, II) Extraktion und Aufreinigung der Einschlusskörper, III) Renaturierung des exprimierten Proteins, IV) Ionenaustauschchromatographie, V) Reversphasenchromatographie, dadurch gekennzeichnet, dass Schritt (I) durchgeführt wird, bis eine optische Dichte des Kulturmediums von 14 bis 50 bei 600 nm (OD 600 14-50) erhalten wird, gefolgt von Induktion, dass Schritt (II) Lyse der Kulturzellen, Zerstören der DNA und Isolieren der Einschlusskörper umfasst, dass in Schritt (III) die Einschlusskörper in denaturierendem Puffer solubilisiert werden und das exprimierte Protein zumindest teilweise zurück in die dimere Form gebracht wird, dass in Schritt (IV) die dimeren und multimeren Formen des exprimierten Proteins von der monomeren Form durch Anionenaustauschchromatographie abgetrennt werden, dass in Schritt (V) die dimeren und multimeren Formen des exprimierten Proteins weiter von der monomeren Form durch Reversphasenchromatographie mit zwei aufeinander folgenden Elutionsschritten mit ansteigendem Gradienten von organischem Lösungsmittel abgetrennt werden, die durch einen Elutionsschritt unter isokratischen Bedingungen getrennt sind, und letztendlich isoliert werden.

A process for extracting and purifying recombinant Placental Growth Factor (PLGF) in dimeric and multimeric active form containing no more than 1,5% of monomeric form, by expression in an inducible expression system in modified prokaryotic cells comprising the following steps: I) fermentation of the prokaryotic cells, II) extraction and purification of the inclusion bodies, III) renaturation of the expressed protein, IV) ion-exchange chromatography, V) reverse-phase chromatography, characterised in that step (I) is performed until obtaining optical density of the culture medium from 14 to 50 at 600 nm (OD 600 14-50) followed by induction, that step (II) comprises lysis of the culture cells, rupture of the DNA and isolation of the inclusion bodies, that in step (III) the inclusion bodies are solubilised into denaturing buffer and the expressed protein is brought, at least partially, back to the dimeric form, that in step (IV) the dimeric and multimeric forms of the expressed protein are separated from the monomeric form by anion exchange chromatography that in step (V) the dimeric and multimeric forms of the expressed protein are further separated from the monomeric form by reverse-phase chromatography with two subsequent elution stages with increasing gradient of organic solvent separated by an elution stage under isochratic conditions and finally isolated.

Verfahrensverbesserungen können fermentationstechnische Maßnahmen wie zum Beispiel Rührung und Versorgung mit Sauerstoff, oder die Zusammensetzung der Nährmedien wie zum Beispiel die Zuckerkonzentration während der Fermentation, oder die Aufarbeitung zur Produktform durch zum Beispiel Ionenaustauschchromatographie oder die intrinsischen Leistungseigenschaften des Mikroorganismus selbst betreffen.

Process improvements may involve fermentation technology measures such as for example stirring and provision of oxygen, or the composition of the nutrient media, such as for example the sugar concentration during the fermentation, or the working-up to the product form by for example ion exchange chromatography or the intrinsic performance properties of the microorganism itself.

Verfahrensverbesserungen können fermentationstechnische Maßnahmen, wie z.B. Rührung und Versorgung mit Sauerstoff, oder die Zusammensetzung der Nährmedien wie z.B. die Zuckerkonzentration während der Fermentation, oder die Aufarbeitung zur Produktform, durch z.B. Ionenaustauschchromatographie, oder die intrinsischen Leistungseigenschaften des Mikroorganismus selbst betreffen.

Methodological improvements can concern measures relating to fermentation technology, such as stirring or supplying with oxygen, or the composition of the nutrient media, such as the sugar concentration during the fermentation, or the working-up to the product form, for example by means of ion exchange chromatography, or the intrinsic performance properties of the microorganism itself.

Verfahrensbesserungen können fermentationstechnische Maßnahmen wie z. B. Rührung und Versorgung mit Sauerstoff, oder die Zusammensetzung der Nährmedien wie z. B. die Zuckerkonzentration während der Fermentation, oder die Aufarbeitung zur Produktform durch z. B. Ionenaustauschchromatographie oder die intrinsischen Leistungseigenschaften des Mikroorganismus selbst betreffen.

Improvements to the processes may relate to measures involving the fermentation technology, for example, stirring and oxygen supply, or the composition of the nutrient media, for example, the sugar concentration during fermentation, or the work-up to the product form, for example, by ion exchange chromatography, or the intrinsic productivity characteristics of the microorganism itself.

Verfahrensverbesserungen können fermentationstechnische Maßnahmen, wie z.B. Rührung und Versorgung mit Sauerstoff, oder die Zusammensetzung der Nährmedien wie z.B. die Zuckerkonzentration während der Fermentation, oder die Aufarbeitung zur Produktform, durch z.B. Ionenaustauschchromatographie, oder die intrinsischen Leistungseigenschaften des Mikroorganismus selbst betreffen.

Methodological improvements can include measures relating to fermentation technology, such as stirring or supplying with oxygen, or the composition of the nutrient media, such as the sugar concentration during the fermentation, or the working-up to the product form, for example by means of ion exchange chromatography, or the intrinsic performance properties of the microorganism itself.