Tramp

dann tramp ich zurück

I tramp back

Tramp

Tramp

Um tramp

To tramp

24. Chaplin hat immer gesagt, der Tramp ist tot, wenn er sprechen muss ...

24 Chaplin has always said the tramp is dead, if he must speak ...

Tramp zeigt momentan eine schlechte Seite von Amerika ..aber ich liebe Amerika

Tramp shows currently a bad side of America... but I love America

Tramp zeigt momentan eine schlechte Seite von Amerika ..aber ich liebe Amerika

Tramp is currently a bad side of America I love America ..but

Verfahren zur Detektion von Nukleinsäuren unter Verwendung festphasengebundener Primer, die durch Bindung an ihre spezifische Zielsequenz eine Konformationsänderung erfahren, die die selektive Abspaltung der Produkte einer zyklischen Amplifikationsreaktion ermöglicht (Trap Release Primer Amplification (TRAmp)), umfassend die Schritte i) Bereitstellen von zu amplifizierenden Nukleinsäuren, ii) Durchführung der Amplifikationsreaktion unter Verwendung von mindestens 2 Primern, von denen mindestens einer an eine Festphase gekoppelt ist, iii) Generierung einer Spaltstelle innerhalb der festphasengebundenen Primer durch eine Konformationsänderung infolge der Bindung an die primerspezifische Zielsequenz, iv) Freisetzung der Reaktionsprodukte in die wässrige Phase durch Spaltung innerhalb der durch Konformationsänderung in iii) generierten Spaltstelle z.B. mit Hilfe eines Restriktionsenzyms, v) Detektieren der in ii) gebildeten Amplifikationsprodukte über fluoreszenzoptische, radioaktive, chemische, chromatographische oder jegliche andere Verfahren zur Detektion von Nukleinsäuren, dadurch gekennzeichnet, daß a) mindestens einer der für die Amplifikationsreaktion eingesetzten Primer in 5'-3'-Richtung folgende Elemente umfasst: Festphasenkopplungsstelle, einen ersten für die Zielsequenz spezifischen Abschnitt, eine durch Konformationsänderung generierbare Schnittstelle, eine fakultativ vorhandene Sequenz, die der Produktdetektion, Re-Amplifikation in einer nachgeschalteten konventionellen PCR-Reaktion (nested-PCR), als Primerbindungsstelle für eine Sequenzreaktion oder weiteren Funktionen dienen kann, fakultative weitere Sequenzabschnitte, die der Stabilisierung der doppelstrangspezifischen Schnittstelle dienen und eine zweite für die zu amplifizierende Nukleinsäure spezifische Sequenz, b) daß neu synthetisierte DNA-Moleküle noch während der Neusynthese oder nach den PCR-Amplifikationszyklen durch Abspaltung mit einem Restriktionsenzym in die wässrige Phase überführt werden.

Method of detecting nucleic acids using solid-phase-bound primers which, by binding to their specific target sequence, undergo a conformation change which enables the selective cleavage of the products of the cyclic amplification reaction (trap release primer amplification (TRAmp)), comprising the steps i) providing nucleic acids to be amplified, ii) carrying out the amplification reaction using at least two primers, of which at least one is coupled with a solid phase, iii) generating a cleavage site within the solid-phase-bound primers by a conformation change resulting from binding to the primer-specific target sequence, iv) releasing the reaction products into the aqueous phase by cleavage within the cleavage site generated in ii) by the conformation change, e.g. with the aid of a restriction enzyme, v) detecting the amplification products formed in ii) via fluorescent-optical, radioactive, chemical, chromatographic or any other methods for detecting nucleic acids, characterized in that a) at least one of the primers employed for the amplification reaction comprises, in 5'-3' direction, the following elements: coupling site for the solid phase, a first target-sequence-specific segment, a double-strand-specific cleavage site, an optional sequence which may serve for product detection, reamplification in subsequent conventional PCR reaction (nested PCR), as primer binding site for a sequence reaction or for further functions, optional further sequence segments which serve for the stabilization of the double-strand-specific cleavage site, and a second sequence which is specific for the nucleic acid to be amplified, b) newly-synthesized DNA molecules are transferred into the aqueous phase by cleavage with the restriction enzyme either still during the synthesis phase or after the PCR amplification cycles.

Andererseits hat die Kommission, wie ich meine, noch keine endgültigen überzeugenden Rezepte zur Bekämpfung des Phänomens der Gefälligkeitsflaggen und der unsicheren Tramp-Schiffe gefunden.

By contrast, the Commission does not seem to have come up with definitive answers to the phenomenon of shady flags and unsafe sub-standard vessels with exploited crews.