Asparagin

Unmittelbar nach einer einstündigen intra- venösen Infusion war Asparagin nicht mehr feststellbar, und L-Asparaginase konnte über mindestens 15 Tage nach der ersten Behandlung mit Oncaspar nachgewiesen werden.

Immediately after a one-hour intravenous infusion, asparagine was no longer detectable and L-asparaginase was detected at least 15 days after the initial Oncaspar treatment.

Isoliertes Asparagin-Proteinase-Polynucleotid nach Anspruch 1, das eine Polynucleotidsequenz von SEQ ID NO: 1 aufweist.

An isolated aspartic proteinase polynucleotide according to claim 1, having a polynucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

Die Transaminierung erfolgt in Gegenwart von L-Asparagin- oder L-Glutaminsäure als Aminodonor.

The transamination is effected in the presence of L-aspartic acid or L-glutamic acid as amino donor.

Die Transaminierung erfolgt in Gegenwart von L-Asparagin- oder L-Glutaminsäure als Aminodonor.

The transamination takes place in the presence of L-aspartic or L-glutamic acid as amino donor.

Zu einzelnen im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens einsetzbaren monofunktionellen Bausteinen gehören u. a. (sowohl ?- als auch andere) wie Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Serin, Threonin, Asparaginsäure, Asparagin, Glutaminsäure, Glutamin, Prolin, Histidin, Tryptophan, Phenylalanin, Tyrosin, Methionin; lineare und verzweigte wie Ethylamin, Propylamin, Butylamin, sec.-Butylamin, tert.-Butylamin, Isobutylamin, Pentylamin, Isopentylamin, 2-Aminopentan, Hexylamin, Heptylamin, 2-Heptylamin, Octylamin, tert.-Octylamin, Nonylamin, Decylamin, Undecylamin, Dodecylamin, Ethanolamin, 3-Amino-1-propanol, 1-Amino-2-propanol, Alaninol, 2-Amino-1-butanol, 4-Amino-1-butanol, 2-Amino-2-methyl-1-propanol, 5-Amino-1-pentanol, Valinol, Leucinol, tert.-Leucinol, N-Propylethylendiamin, 2-Ethylamino-ethylamin; lineare und verzweigte , wie Ethanthiol, 1-Propanthiol, 2-Propanthiol, 1-Butanthiol, sec.-Butylmercaptan, tert.-Butylmercaptan, Isobutylmercaptan, 1-Pentanthiol, 1-Hexanthiol, 1-Heptanthiol, 1-Octanthiol, 1-Nonanthiol, 1-Decanthiol, 1-Undecanthiol, 1-Dodecanthiol, tert.-Dodecanthiol, 1-Tetradecanthiol, 1-Hexadecanthiol, 1-Octadecanthiol, Mercaptoethanol, 3-Mercapto-1-propanol, 4-Mercapto-1-butanol, 3-Mercapto-2-butanol, 6-Mercapto-1-hexanol, 8-Mercapto-1-octanol, 10-Mercapto-1-decanol, 11-Mercapto-1-undecanol, Mercaptoessigsäure und deren Salze und Ester, 3-Mercaptopropionsäure und deren Salze und Ester, 11-Mercaptoundecansäure und deren Salze und Ester, Mercaptoethansulfonsäure und deren Salze, 3-Mercapto-1-propansulfonsäure und deren Salze, Mercaptobrenztraubensäure und deren Salze, 2-Diethylaminoethanthiol(-hydrochlorid), 3-Mercaptopropylmethyldimethoxysilan, 3-Mercaptopropyl-triethoxysilan, 3-Mercaptopropyl-trimethoxysilan, N-Methylmercaptoacetamid, Mercaptophenol.

The individual monofunctional structural elements which can be used within the framework of the method of the invention include, among others, amino acids (both ?- and others) such as glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, asparaginic acid, asparagine, glutamic acid, glutamine, proline, histidine, tryptophane, phenylalanine, tyrosine, methionine; linear and branched amines such as ethylamine, propylamine, butylamine, sec.-butylamine, tert.-butylamine, isobutylamine, pentylamine, isopentylamine, 2-aminopentane, hexylamine, heptylamine, 2-heptylamine, octylamine, tert.-octylamine, nonylamine, decylamine, undecylamine, dodecylamine, ethanolamine, 3-amino-1-propanol, 1-amino-2-propanol, alaninol, 2-amino-1-butanol, 4-amino-1-butanol, 2-amino-2-methyl-1-propanol, 5-amino-1-pentanol, valinol, leucinol, tert.-leucinol, N-propylethylene diamine, 2-ethylamino-ethylamine; linear and branched thiols such as ethanethiol, 1-propanethiol, 2-propanethiol, 1-butanethiol, sec.-butyl mercaptan, tert.-butyl mercaptan, isobutyl mercaptan, 1-pentanethiol, 1-hexanethiol, 1-heptanethiol, 1-octanethiol, 1-nonanethiol, 1-decanethiol, 1-undecanethiol, 1-dodecanethiol, tert.-dodecanethiol, 1-tetradecanethiol, 1-hexadecanethiol, 1-octadecanethiol, mercapto ethanol, 3-mercapto-1-propanol, 4-mercapto-1-butanol, 3-mercapto-2-butanol, 6-mercapto-1-hexanol, 8-mercapto-1-octanol, 10-mercapto-1-decanol, 11-mercapto-1-undecanol, mercaptoacetic acid and its salts and esters, 3-mercaptopropionic acid and its salts and esters, 11-mercaptoundecanoic acid and its salts and esters, mercaptoethane sulfonic acid and its salts, 3-mercapto-1-propane sulfonic acid and its salts, mercaptopyruvic acid and its salts, 2-diethylamino ethanethiol (-hydrochloride), 3-mercaptopropylmethyldimethoxysilane, 3-mercaptopropyltriethoxysilane, 3-mercaptopropyltrimethoxysilane, N-methylmercaptoacetamide, mercaptophenol.

Verbindungen der Formel I gemäss Anspruch 1, worin R 1 Octanoyl, Decanoyl, Dodecanoyl, Palmitoyl, Niederalkanoyl, Hydroxyniederalkanoyl, Niederalkoxyniederalkanoyl, Niederalkoxyniederylkoxyniederalkanoyl, Niederalkoxyniederalkoxyniederalkoxyniederalkanoyl, Phenoxyniederalkanoyl, Phenylniederalkoxyniederalkanoyl, Amino-, Niederalkylamino- oder Diniederalkylamino-niederalkoxy-2-niederalkanoyl, Amino-, Niederalkylamino- oder Diniederalkylamino-niederalkoxyniederalkoxy-2-niederalkanoyl,Niederalkanoyloxyniederalkanoyl, Carboxyniederalkanoyl, Oxoniederalkanoyl, 5-Hydroxymethyl-furan-2-ylcarbonyl, 2- oder 3-Pyrrolylcarbonyl, Furylcarbonyl, Thienylcarbonyl, Pyridylniederalkanoyl, Chinolylcarbonyl, Isochinolylcarbonyl, 2-, 3- oder 5-Indolylcarbonyl, Pyrrolidinyl-(2- oder 3-)carbonyl, 2-, 3- oder 4-Piperidinylcarbonyl, 1,2,3,4-Tetrahydrochinolyl-2-, -3- oder -4-carbonyl, 1,2,3,4-Tetrahydroisochinolyl-1-, -3- oder 4-carbonyl, Imidazolylniederalkanoyl, Pyrazolylniederalkanoyl, Morpholinocarbonyl, Thiomorpholinocarbonyl, Morpholinoacetyl, Thiomorpholinoacetyl, 4-Niederalkyl-1-piperazinoacetyl, Indolylacetyl, Benzofuranylacetyl, Phenylniederalkanoyl, Phenylrest unsubstituiert, mono- oder mehrfachsubstituiert durch Niederalkyl, Haloniederalkyl, Halogen, Hydroxy, Niederalkoxy, Piperidinomethyl, Piperazin-1-ylmethyl, 4-Niederalkyl-piperazin-1-ylmethyl, Morpholinomethyl, Thiomorpholinomethyl, Cyano und/oder Nitro, oder das über eine Carboxygruppe gebundene Radikal einer aliphatischen Aminosäure ausgewählt aus Alanin, Valin, Norvalin, Leucin, 3-Aminopropionsäure, 2-Aminobuttersäure und Isoleucin oder einer Aminosäure ausgewählt aus Glycin, Asparagin, Glutamin, Methionin, Lysin, Phenylalanin, 3-Aminobuttersäure, 4-Aminobuttersäure, 3-Aminopentansäure, 4-Aminopentansäure, 5-Aminopentansäure, 3-Aminohexansäure, 4-Aminohexansäure und 5-Aminohexansäure, wobei (ausser bei Fehlen asymmetrischer C-Atome) jede der genannten Aminosäuren in der D-, L- oder (D,L)-Form vorliegen kann, eine ?-Aminogruppe, falls vorhanden, unsubstituiert oder ein- oder zweifach N-alkyliert durch Niederalkyl, durch Phenylniederalkyl, durch 2-, 3- oder 4-Pyridylniederalkyl, Imidazolylniederalkyl, und/oder durch 2-, 3- oder 4-Pyridylniederalkyl, wie 2-, 3- oder 4-Pyridylmethyl, und/oder N-acyliert durch Niederalkoxycarbonyl,oder durch Benzyloxycarbonyl vorliegt, und pharmazeutisch verwendbare Salze davon.

A compound of formula I according to claim 1 wherein R 1 is octanoyl, decanoyl, dodecanoyl, palmitoyl, lower alkanoyl, hydroxy-lower alkanoyl, lower alkoxy-lower alkanoyl, lower alkoxy-lower alkoxy-lower alkanoyl, lower alkoxy-lower alkoxy-lower alkoxy-lower alkanoyl, phenoxy-lower alkanoyl, phenyl-lower alkoxy-lower alkanoyl, amino-, lower alkylamino- or di-lower alkylamino-lower alkoxy-2-lower alkanoyl, amino-, lower alkylamino- or di-lower alkylamino-lower alkoxy-lower alkoxy-2-lower alkanoyl, lower alkanoyloxy-lower alkanoyl, carboxy-lower alkanoyl, oxo-lower alkanoyl, 5-hydroxymethyl-furan-2-ylcarbonyl, 2- or 3-pyrrolylcarbonyl, furylcarbonyl, thienylcarbonyl, pyridyl-lower alkanoyl, quinolylcarbonyl, isoquinolylcarbonyl, 2-, 3- or 5-indolylcarbonyl, pyrrolidinyl-(2- or 3-)carbonyl, 2-, 3- or 4-piperidinylcarbonyl, 1,2,3,4-tetrahydroquinolyl-2-, -3- or -4-carbonyl, 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolyl-1-, -3- or -4-carbonyl, imidazolyl-lower alkanoyl, pyrazolyl-lower alkanoyl, morpholinocarbonyl thiomorpholinocarbonyl, morpholinoacetyl, thiomorpholinoacetyl, 4-lower alkyl-1-piperazinoacetyl, indolylacetyl, benzofuranylacetyl, phenyl-lower alkanoyl that is unsubstituted or mono- or poly-substituted in the phenyl radical by lower alkyl, halo-lower alkyl, halogen, hydroxy, lower alkoxy, piperidinomethyl, piperazin-1-ylmethyl, 4-lower alkylpiperazin-1-ylmethyl, morpholinomethyl, thiomorpholinomethyl, cyano and/or by nitro; or the residue, bonded via a carboxy group, of an aliphatic amino acid selected from alanine, valine, norvaline, leucine, 3-aminopropionic acid, 2-aminobutyric acid and isoleucine, or of an amino acid selected from glycine, asparagine, glutamine, methionine, lysine, phenylalanine, 3-aminobutyric acid, 4-aminobutyric acid, 3-aminopentanoic acid, 4-aminopentanoic acid, 5-aminopentanoic acid, 3-aminohexanoic acid, 4-aminohexanoic acid and 5-aminohexanoic acid, it being possible for each of the mentioned amino acids to be in the D-, L- or (D,L)-form (except where there are no asymmetric carbon atoms), and an ?-amino group, if present, is unsubstituted or is mono- or di-N-alkylated by lower alkyl, by phenyl-lower alkyl, by 2-, 3- or 4-pyridyl-lower alkyl, by imidazolyl-lower alkyl and/or by 2-, 3- or 4-pyridyl-lower alkyl, such as 2-, 3- or 4-pyridylmethyl, and/or is N-acylated by lower alkoxycarbonyl or by benzyloxycarbonyl, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Nukleinsäure, die eine Dihydroflavanol-4-reduktase (DFR) kodiert, welche die Reduktion von Dihydrokaempferol (DHK) gegenüber von Dihydroquercetin (DHQ) und Dihydromyricetin (DHM) zu Leucocyanidinen bevorzugt katalysiert, umfassend DFR-Nukleinsäuren, worin das Codon für den Asparagin(N oder Asn)-Rest an Position 134 des kodierten Polypeptids von Figur 2 zu einem Codon für Leucin (L oder Leu) mutiert ist.

A nucleic acid encoding a dihydroflavanol-4-reductase (DFR) that preferentially catalyses the reduction of dihydrokaempferol (DHK) over dihydroquercetin (DHQ) and dihydromyricetin (DHM) to leucocyanidines, comprising DFR nucleic acids wherein the codon for asparagine (N or Asn) residue at position 134 of the encoded polypeptide as identified by Fig. 2 has been mutated to a codon for leucine (L or Leu).

Verbindung mit der Formel oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz, Prodrug oder Ester davon, worin R Wasserstoff, Alkoxycarbonyl-, Aralkoxycarbonyl-, Alkylcarbonyl-, Cycloalkylcarbonyl-, Cycloalkylalkoxycarbonyl-, Cycloalkylalkanoyl-, Alkanoyl-, Aralkanoyl-, Aroyl-, Aryloxycarbonyl-, Aryloxycarbonylalkyl-, Aryloxyalkanoyl-, Heterocyclylcarbonyl-, Heterocyclyloxycarbonyl-, Heterocyclylalkanoyl-, Heterocyclylalkoxycarbonyl-, Heteroaralkanoyl-, Heteroaralkoxycarbonyl-, Heteroaryloxy-carbonyl-, Heteroaroyl-, Alkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Cycloalkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Aryloxyalkyl-, Heteroaryloxyalkyl-, Hydroxyalkyl-, Aminocarbonyl-, Aminoalkanoylund mono- und disubstituierte Aminocarbonyl- und mono- und disubstituierte Aminoalkanoylreste, worin die Substituenten ausgewählt sind aus Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Cycloalkyl-, Cycloalkylalkyl-, Heteroaryl-, Heteroaralkyl-, Heterocycloalkyl-, Heterocycloalkylalkylresten oder, wo die Aminocarbonyl- und Aminoalkanoylreste disubstituiert sind, diese Substituenten zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Heterocycloalkyl- oder Heteroarylrest bilden, bedeutet; R' Wasserstoff oder Reste, wie sie für R definiert sind, oder R"SO -, worin R" Reste darstellt, wie sie für R definiert sind, bedeutet; oder R und R' zusammen mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen Heterocycloalkyl- und Heteroarylrest darstellen; R Wasserstoff, -CH SO NH , -CH CO CH , -CO CH , -CONH , -CH C(O)NHCH , -C(CH ) (SH), -C(CH ) (SCH ), -C(CH ) (S[O]CH ), C(CH ) (S[O] CH ), Alkyl-, Halogenalkyl-, Alkenyl-, Alkinyl- und Cycloalkylreste und Aminosäureseitenketten ausgewählt aus Asparagin-, S-Methylcystein- und Sulfoxid(SO)- und Sulfon(SO )-Derivaten davon, Isoleucin-, Alloisoleucin-, Alanin-, Leucin-, tert-Leucin-, Phenylalanin-, Ornithin-, Histidin-, Norleucin-, Glutamin-, Threonin-, Glycin-, Allothreonin-, Serin-, O-Alkylserin-, Asparaginsäure-, beta-Cyanoalaninund Valinseitenketten bedeutet; R und R unabhängig Wasserstoff und Reste, wie sie für R definiert sind, bedeuten, oder eines von R und R zusammen mit R und den Kohlenstoffatomen, an die R , R und R gebunden sind, einen Cycloalkylrest darstellt; R Alkyl-, Aryl-, Cycloalkyl-, Cycloalkylalkyl- und Aralkylreste, welche Reste gegebenenfalls substituiert sind mit einer Gruppe ausgewählt aus Alkyl- und Halogenresten, -NO , -C?N, CF , -OR , -SR , worin R Wasserstoff und Alkylreste darstellt, bedeutet; R Wasserstoff, Alkyl-, Halogenalkyl-, Alkenyl-, Alkinyl-, Hydroxyalkyl-, Alkoxyalkyl-, Cycloalkyl-, Cycloalkylalkyl-, Heterocycloalkyl-, Heteroaryl-, Heterocycloalkylalkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Heteroaralkyl-, Aminoalkyl- und mono- und disubstituierte Aminoalkylreste, worin die Substituenten ausgewählt sind aus Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Cycloalkyl-, Cycloalkylalkyl-, Heteroaryl-, Heteroaralkyl-, Heterocycloalkyl- und Heterocycloalkylalkylresten, oder, im Falle eines disubstituierten Aminoalkylrestes, die Substituenten zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Heterocycloalkyl- oder einen Heteroarylrest bilden, bedeutet; R Reste darstellt, wie sie durch R definiert sind, mit Ausnahme von Wasserstoff; R Wasserstoff und Alkylreste darstellt; x für 0, 1 oder 2 steht; t für 0 oder 1 steht; und Y für O, S und NR steht, wobei R Wasserstoff und Reste, wie sie für R definiert sind, darstellt.

A compound represented by the formula: or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug or ester thereof wherein: R represents hydrogen, alkoxycarbonyl, aralkoxycarbonyl, alkylcarbonyl, cycloalkylcarbonyl, cycloalkylalkoxycarbonyl, cycloalkylalkanoyl, alkanoyl, aralkanoyl, aroyl, aryloxycarbonyl, aryloxycarbonylalkyl, aryloxyalkanoyl, heterocyclylcarbonyl, heterocyclyloxycarbonyl, heterocyclylalkanoyl, heterocyclylalkoxycarbonyl, heteroaralkanoyl, heteroaralkoxycarbonyl, heteroaryloxy-carbonyl, heteroaroyl, alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, aryl, aralkyl, aryloxyalkyl, heteroaryloxyalkyl, hydroxyalkyl, aminocarbonyl, aminoalkanoyl, and mono- and disubstituted aminocarbonyl and mono- and disubstituted aminoalkanoyl radicals wherein the substituents are selected from alkyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, heteroaryl, heteroaralkyl, heterocycloalkyl, heterocycloalkyalkyl radicals, or wherein said aminocarbonyl and aminoalkanoyl radicals are disubstituted, said substituents along with the nitrogen atom to which they are attached form a heterocycloalkyl or heteroaryl radical; R' represents hydrogen and radicals as defined for R or R"SO - wherein R" represents radicals as defined for R ; or R and R' together with the nitrogen to which they are attached represent heterocycloalkyl and heteroaryl radical; R represents hydrogen, -CH SO NH , -CH CO CH , -CO CH , -CONH , -CH C(O)NHCH , -C(CH ) (SH), -C(CH ) (SCH ), -C(CH ) (S[O]CH ), -C(CH )2(S[O] CH ), alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl and cycloalkyl radicals, and amino acid side chains selected from asparagine, S-methyl cysteine and the sulfoxide (SO) and sulfone (SO ) derivatives thereof, isoleucine, allo-isoleucine, alanine, leucine, tert-leucine, phenylalanine, ornithine, histidine, norleucine, glutamine, threonine, glycine, allo-threonine, serine, O-alkyl serine, aspartic acid, beta-cyano alanine and valine side chains; R and R independently represent hydrogen and radicals as defined for R or one of R and R , together with R and the carbon atoms to which R , R and R are attached, represent a cycloalkyl radical; R represents alkyl, aryl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl and aralkyl radicals, which radicals are optionally substituted with a group selected from alkyl and halogen radicals, -NO , -C?N, CF , -OR , -SR , wherein R represents hydrogen and alkyl radicals; R represents hydrogen, alkyl, haloalkyl, alkenyl, alkynyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkyl, heteroaryl, heterocycloalkylalkyl, aryl, aralkyl, heteroaralkyl, aminoalkyl and mono- and disubstituted aminoalkyl radicals, wherein said substituents are selected from alkyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, heteroaryl, heteroaralkyl, heterocycloalkyl, and heterocycloalkylalkyl radicals, or in the case of a disubstituted aminoalkyl radical, said substituents along with the nitrogen atom to which they are attached, form a heterocycloalkyl or a heteroaryl radical; R represents radicals as defined by R except for hydrogen; R represents hydrogen and alkyl radicals; x represents 0, 1, or 2; t represents either 0 or 1; and Y represents O, S and NR wherein R represents hydrogen and radicals as defined for R .