Kationenaustauscher

die anbindung von insulin kann daher über einen kationenaustauscher erfolgen

the binding of insulin can therefore take place over a cation exchanger

Von dem Kationenaustauscher werden 1,5 l eingesetzt.

1.5 l of the cation exchanger are employed.

Anoden- und Kathodenraum sind durch eine Kationenaustauscher-Membran getrennt.

The anode and the cathode chambers were separated by a cation exchange membrane.

Man kann im Prinzip beliebige bekannte Kationenaustauscher verwenden.

In principle, any known cation exchanger may be used.

Stark saure Kationenaustauscher, deren funktionelle Gruppen aus Sulfonsäureeinheiten bestehen, finden z. B. außer bei der Entsalzung, Reinigung, Enthärtung von Wasser sowie wäßrigen Lösungen und bei der Trinkwasseraufbereitung vor allem auch als fester Säurekatalysator bei chemischen Synthesen oder als Träger von Metallkatalysatoren (s. Haag et al. DE-OS 18 00 371) Verwendung (s. W. Neier, Chem. Ind.

Strongly acidic cation exchangers, of which the functional groups consist of sulfonic acid units, are used not only in the desalination, purification and softening of water and aqueous solutions and in the production of drinking water, but also and above all as a solid acid catalyst in chemical syntheses or as a support for metal catalysts (see Haag et al., DE-OS 18 00 371; W. Neier, Chem. Ind.

Verfahren zur Herstellung eines menschlichen Urokinase-Zymogens mit den folgenden Eigenschaften: (a) Molekulargewicht: etwa 50 000, bestimmt durch SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese unter reduzierenden und nicht-reduzierenden Bedingungen; (b) Primärstruktur: Einketten-Polypeptid, das nach Behandlung mit katalytischen Mengen von Plasmin in die Zweikettenform von Urokinase H und L umgewandelt wird, (c) Affinität für Fibrin: selektiv und hoch, (d) fibrinolytische Aktivität: gering, wenn sie mit dem Urokinasesubstrat S-2444 bestimmt wird; (e) spezifische Plasminogen-Aktivator-(Urokinase)-Aktivität: gering, ohne Plasminbehandlung und mindestens 80 000 E/mg Protein, wenn es durch Behandlung mit Plasmin in Urokinase umgewandelt wird; (f) Quelle: erhältlich aus menschlichen Nierenzellen; und (g) Glykosylierungsmuster: wie bei der Synthese in menschlichen Nierenzellen, dadurch gekennzeichnet , daß die Urokinase-Zymogen produzierenden Zellen, die von menschlichen Nieren stammen, in einem serumfreien Gewebskulturmedium gezüchtet werden, das mit menschlichem Albumin ergänzt ist, der Überstand der Kulturflüssigkeit einer Chromatographie an einem schwachen Kationenaustauscher bei einem pH-Wert von 4,5 bis 6,5 unterworfen wird und die Urokinase-Zymogen enthaltende Fraktion mit einer Pufferlösung von pH 7,5 bis 9,5 eluiert wird und das Eluat einer Affinitätschromatographie unter Verwendung eines immobilisierten anti-Urokinase-Zymogen-Antikörpers bei einem pH-Wert von 6 bis 8 unterworfen wird und das Urokinase-Zymogen mit einer Pufferlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 4 eluiert wird.

A process for preparing a human urokinase zymogen displaying the following features: (a) molecular weight: about 50,000 as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis under reducing and non-reducing conditions; (b) primary structure: single chain polypeptide which is converted after treatment with catalytic amounts of plasmin into the two-chain form of urokinase H and L; (c) affinity for fibrin: selective and strong; (d) fibrinolytic activity: little when determined with the urokinase substrate S-2444; (e) specific plasminogen activator (urokinase) activity: little without plasmin treatment and at least 80,000 U/mg protein when converted into urokinase by a treatment with plasmin; (f) source: obtainable from human kidney cells; and (g) glycosylation pattern: as synthesized in human kidney cells; characterized in that urokinase zymogen-producing cells derived from human kidneys are cultivated in a serum-free tissue culture medium supplemented with human albumin, subjecting the supernatant of the culture fluid to a chromatography on a weak cation exchanger at a pH value of 4.5 - 6.5 and eluting the urokinase zymogen-containing fraction with a buffer solution of pH 7.5 - 9.5 and subjecting the eluate to an affinity chromatography using an immobilized antiurokinase zymogen antibody at a pH value of 6 - 8 and eluting the urokinase zymogen with a buffer solution having a pH value of 2 - 4.

Verfahren zur Herstellung von rekombinanten humanen Serumalbumin, umfassend die Schritte: (1) Behandlung eines Kulturüberstandes eines Wirts, der humanes Serumalbumin exprimiert, mit einer ersten Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100.000 bis 500.000 und anschließend mit einer zweiten Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 1.000 bis 50.000, um ein erstes Filtrat zu erhalten; (2) Hitzebehandeln des ersten Filtrats bei 50 bis 70°C für 30 Minuten bis 5 Stunden, um eine erhitzte Probe zu erhalten; (3) Säurebehandlung der erhitzten Probe bei einem pH von 3 bis 5, um eine säurebehandelte Probe zu erhalten; (4) Behandeln der säurebehandelten Probe mit einer Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100.000 bis 500.000, um ein zweites Filtrat zu erhalten; (5) Unterwerfen des zweiten Filtrats einem Kationenaustauscher bei einem pH von 3 bis 5 und einer Salzkonzentration von 0,01 bis 0,2 M und anschließend Aussetzen des Kationenaustauschers einem pH von 8 bis 10 und einer Salzkonzentration von 0,2 bis 0,5 M, um ein erstes Eluat zu erhalten; (6) Inkontaktbringen des ersten Eluats mit einem Träger für eine hydrophobe Chromatographie bei einem pH von 6 bis 8 und einer Salzkonzentration von 0,01 bis 0,5 M und Gewinnen der nicht-adsorbierten Fraktionen, um ein zweites Eluat zu erhalten; und (7) Inkontaktbringen des zweiten Eluats mit einem Anionanaustauscher bei einem pH von 6 bis 8 und einer Salzkonzentration von 0,01 bis 0,1 M und Gewinnen der nicht-adsorbierten Fraktionen, um das Albumin zu gewinnen.

A process for producing a recombinant human serum albumin comprising the steps of: (1) treating a culture supernatant of a host which expresses human serum albumin, with a first ultrafiltration membrane having a molecular weight exclusive limit of from 100,000 to 500,000 and then with a second ultrafiltration membrane having a molecular weight exclusive limit of from 1,000 to 50,000 to yield a first filtrate; (2) heat-treating the first filtrate at 50 to 70°C for 30 minutes to 5 hours to yield a heated sample; (3) acid-treating the heated sample at a pH of from 3 to 5 to yield an acid-treated sample; (4) treating the acid-treated sample using an ultrafiltration membrane having a molecular weight exclusive limit of from 100,000 to 500,000 to yield a second filtrate; (5) exposing the second filtrate to a cation exchanger at a pH of 3 to 5 and a salt concentration of 0.01 to 0.2 M, and then exposing said cation exchanger to a pH of 8 to 10 and a salt concentration of 0.2 to 0.5 M to yield a first eluate; (6) allowing the first eluate to contact with a carrier for hydrophobic chromatography at a pH of 6 to 8 and a salt concentration of 0.01 to 0.5 M, and recovering non-adsorbed fractions to yield a second eluate; and (7) allowing the second eluate to contact with an anion exchanger at a pH of 6 to 8 and a salt concentration of 0.01 to 0.1 M, and recovering non-adsorbed fractions to yield said albumin.

Kationenaustauscher nach mindestens einem der Ansprüche 22-29, dadurch gekennzeichnet, dass der Ligand -X-Y(-Z) n abgeleitet ist aus Hydrochinonsulfonat, insbesondere durch Kupplung einer ringgebundenen OH-Gruppe mit dem Spacer, insbesondere der OH-Gruppe, welche meta oder ortho zu -SO 3 - (Z 1 = -SO 3 - und Z 2 = -OH/-O - ; und n = 2) ist.

The ration exchanger of any of the claims 22-29, characterised in that the ligand -X-Y(-Z) n is derived from hydroquinone sulphonate, particularly via coupling of a ring bound OH group to the spacer, particularly the OH group, which is meta or ortho to -SO 3 - (Z 1 = -SO 3 -and Z 2 = -OH/-O - ; and n = 2).