rekombinant

Bei dem GP1b-Protein, das an die fixierten Thrombozytenfragmente gebunden wird, kann es sich um natives, d. h. aus natürlichen Quellen, wie z. B. aus Plasma, isoliertes GP1b-Protein oder um rekombinant hergestelltes GP1b-Protein handeln.

The GP1b protein which is bound to the fixed platelet fragments may be native GP1b protein, i.e. that isolated from natural sources such as, for example, from plasma, or recombinantly prepared GP1b protein.

Antikörperzusammensetzung nach einem der Ansprüche 24 bis 32, wobei die Antikörpermoleküle rekombinant produziert worden sind.

An antibody composition as claimed in any of claims 24 to 32, wherein the antibody molecules are recombinantly produced.

Wirkungsmechanismus Der Impfstoff enthält abgetötete ganze V. cholerae O1 Bakterien und die rekombinant erzeugte nicht toxische B-Untereinheit des Cholera-Toxins (CTB).

Mechanism of action The vaccine contains killed whole V. cholerae O1 bacteria and the recombinant non-toxic B-subunit of the cholera toxin (CTB).

Verfahren zur Durchführung eines Hochdurchsatztests zur Bestimmung des Vorliegens von PrPsc in einer Gewebeprobe, die post mortem aus Gehirn entnommen wurde, wobei der Test den Arbeitsablauf von (A) Probenherstellung, (B) Probenbehandlung, (C) Probenanalyse, (D) Kontrollen und (E) Klassifizierung der Ergebnisse der Analyse als positiv oder negativ umfasst, wobei (A) folgende Schritte umfasst (a) Bereitstellen, in einem standardisierten Format, eines Ständers mit einem Satz einzeln beschrifteter Behälter, wobei der Behältersatz eine Untergruppe für Kontrollreaktionen oder Kontrollbehälter, die wie in (D) vorgesehen verarbeitet werden, und eine Untergruppe von Behältern für die Probenanalyse oder Analysebehälter umfasst, (b) Bereitstellen in jedem Analysebehälter (i) von 3 bis 6 kugelförmigen Perlen, wobei jede Perle zwischen 50 mg und 100 mg wiegt, und (ii) eines Volumens an Homogenisierungspuffer, wobei der Homogenisierungspuffer ein proteolytisches Enzym enthält, das in Gegenwart eines chaotropen Mittels eine Proteolyse ausführen kann; (d) Bereitstellen einer Gewebeprobe aus Gehirn, wobei die Gewebeprobe durch ein Etikett identifiziert wird, das einzigartige Informationen enthält, welche den Ursprung der Gewebeprobe definieren; (e) Durchführen der Schritte (i) Aufzeichnen des Etiketts der Gewebeprobe, (ii) Überführen der Gewebeprobe in einen Analysebehälter, (iii) Aufzeichnen des Etiketts des Analysebehälters, (iv) Korrelieren der im Schritt (i) aufgezeichneten Information mit den im Schritt (iii) aufgezeichneten Informationen, (v) Wiederholen der Schritte (i), (ii), (iii) und (iv), bis die gewünschte Menge an Analysebehältern in dem Ständer mit Probengewebe gefüllt ist; (f) Durchführen der Schritte (ii) Verschließen der Behälter des Ständers mit Verschlussvorrichtungen, gefolgt von (ii) Schütteln des Ständers mit den Behältern unter Verwendung einer Schüttelvorrichtung, wobei das Schütteln die Perlen vom Boden an die Oberseite jedes Analysebehälters bewegt, wodurch das Probengewebe darin homogenisiert wird, gefolgt von (iii) Sedimentieren von Gewebetrümmern in den Analysebehältern, gefolgt von (iv) Öffnen der Behälter und Absaugen eines Aliquots des Überstandes aus jedem Behälter, wobei (B) nach (A) durchgeführt werden muss und folgende Schritte umfasst (a) Bereitstellen einer konditionierten Mikrotiterplatte, wobei jede Vertiefung als Trockensubstanz eine festgelegte Menge eines chaotropen Mittels enthält, wobei das chaotrope Mittel an die Wand der Vertiefung gebunden ist, gefolgt von (b) Überführen der Überstände von (A) Schritt (f) in die Vertiefungen der Mikrotiterplatte, wobei das überführte Volumen derart gewählt wird, dass das Auflösen der Trockensubstanz in jeder Vertiefung zu einer Konzentration zwischen 300 mM und 2 M des chaotropen Mittels im Überstand führt, gefolgt von (c) Lösen des chaotropen Mittels, gefolgt von (d) Inkubieren der Mikrotiterplatte bei einer Temperatur zwischen 15°C und 50°C, wodurch die Proteolyse ermöglicht wird, gefolgt von (e) Inhibieren der Aktivität des proteolytischen Enzyms, gefolgt von (f) Erhöhen der Konzentration des chaotropen Mittels in dem Gemisch in jeder Vertiefung auf einen Wert zwischen 3,5 M und 5 M, gefolgt von (g) Inkubieren der Mikrotiterplatte unter stetigem Schütteln bei Raumtemperatur, wobei die Komponenten in den Vertiefungen gemischt werden, wodurch behandelte Proben bereitgestellt werden, wobei (C) nach (B) durchgeführt werden muss und folgende Schritte umfasst (a) Bereitstellen einer Nachweis-Mikrotiterplatte, die mit Streptavidin beschichtet ist, (b) Überführen eines Aliquots von jeder behandelten Probe von (B) Schritt (f) in eine Vertiefung der Nachweis-Mikrotiterplatte, gefolgt von (c) Zugeben eines drei- bis zehnfachen Volumens einer Nachweislösung zu dem Aliquot, die ein erstes und zweites Bindungsmittel enthält, das für zwei getrennte Epitope von entfaltetem PrP(27-30) spezifisch ist, wobei das erste spezifische Bindungsmittel biotinyliert ist und das zweite spezifische Bindungsmittel mit einem Reporterenzym konjugiert ist, gefolgt von (d) Inkubieren der Nachweis-Mikrotiterplatte unter stetigem Schütteln, wodurch die Komponenten in den Vertiefungen gemischt werden und man Komplexe aus den spezifischen Bindungsmitteln und entfaltetem PrP(27-30) bilden lässt, gefolgt von (e) Entfernen der Flüssigkeit aus den Vertiefungen der Nachweis-Mikrotiterplatte und Waschen der Vertiefungen mit Waschpuffer, gefolgt von (f) Zugeben von Reporterenzym-Substratlösung zu den Vertiefungen der Nachweis-Mikrotiterplatte und Inkubieren der Platte, gefolgt von (g) Durchführen der Schritte (i) Messen des Umsatzes des Substrates in einer Vertiefung als optische Dichte (OD), wodurch ein Messwert für die Vertiefung bereitgestellt wird, gefolgt von (ii) Aufzeichnen des Messwerts, wobei eine Überablesung als OD = 4,0 aufgezeichnet wird, (iii) Korrelieren des aufgezeichneten Messwerts von (ii) mit den Informationen, die für die entsprechende Gewebeprobe in (A) Schritt (e) Schritt (i) aufgezeichnet wurden, (iv) Wiederholen der Schritte (i) bis (iii), bis die Messwerte im Hinblick auf alle Gewebeproben verarbeitet worden sind, wodurch Analysedaten in Bezug auf die Proben erhalten werden, wobei (D) folgende Schritte umfasst (a) Bereitstellen eines Reagens, das ein rekombinant hergestelltes, lösliches Fusionsprotein enthält, das die Aminosäuresequenzen von (i) einem oder mehreren löslichen Trägerpolypeptiden, (ii) einem oder mehreren Epitopen von PrP(27-30), auf die das erste spezifische Bindungsmittel abzielt, und (iii) einem oder mehreren Epitopen von PrP(27-30), auf die das zweite spezifische Bindungsmittel abzielt, umfasst, (b) vor der Durchführung der Schritte (A) Schritt (f) und des anschließenden Arbeitsablaufs Durchführen der folgenden Schritte (i) Aufzeichnen der Informationen der Etiketten einer ersten Menge an Kontrollbehältern von (A) Schritt (a), gefolgt von (ii) Bereitstellen eines Aliquots des Homogenisierungspuffers von (A) Schritt (b) Schritt (i) in der ersten Menge an Kontrollbehältern, wodurch negative Kontrollen bereitgestellt werden, gefolgt von (iii) Korrelieren der aufgezeichneten Informationen von (i) mit den negativen Kontrollen, (iv) Aufzeichnen der Informationen der Etiketten einer zweiten Menge an Kontrollbehältern von (A) Schritt (a), gefolgt von (v) Bereitstellen, in der zweiten Menge an Kontrollbehältern, eines Aliquots einer Flüssigkeit, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Homogenisierungspuffer ohne das proteolytische Enzym und Homogenisierungspuffer, der zusätzlich eine wirksame Menge eines Proteaseinhibitors enthält, wodurch positive Kontrollen bereitgestellt werden, gefolgt von (vi) Korrelieren der aufgezeichneten Informationen von (iv) mit den positiven Kontrollen, gefolgt von (vii) Abgeben einer abgemessenen Menge an Kontrollreagens in jeden Kontrollbehälter, (viii) Einschließen der positiven und negativen Kontrollen in (A) Schritt (f), (B) und (C) Schritte (a) bis (f), (c) Durchführen der folgenden Schritte (i) Wiederholen von (C) Schritt (g) Schritte (i) bis (iii) für jede Vertiefung der Nachweis-Mikrotiterplatte, die eine negative Kontrolle enthält, bis die Messwerte in Bezug auf alle negativen Kontrollen verarbeitet worden sind, (ii) Korrelieren der aufgezeichneten Messwerte von (i) mit den für die negativen Kontrollen aufgezeichneten Informationen, wodurch negative Kontrolldaten erhalten werden, (iii) Wiederholen von (C) Schritt (g) Schritte (i) bis (iii) für jede Vertiefung der Nachweis-Mikrotiterplatte, die eine positive Kontrolle enthält, bis die Messwerte in Bezug auf alle positiven Kontrollen verarbeitet worden sind, (iv) Korrelieren der aufgezeichneten Messwerte von (iii) mit den für die positiven Kontrollen aufgezeichneten Informationen, wodurch positive Kontrolldaten erhalten werden, wobei (E) nach (A), (B), (C) und (D) durchgeführt werden muss und folgende Schritte umfasst (a) Berechnen des Mittelwerts der Messwerte der positiven Kontrolldaten [M(p)], die von (D) Schritt (c) geliefert werden, (b) Berechnen des Mittelwerts der Messwerte der negativen Kontrolldaten [M(n)], die von (D) Schritt (c) geliefert werden, (c) Berechnen des Mittelwerts der Messwerte der Analysedaten [M(a)], die von (C) Schritt (d) geliefert werden, (d) Berechnen eines Ausschlusswerts, (e) Vergleichen des Messwerts einer Gewebeprobe, der von (C) Schritt (d) geliefert wird, mit dem Ausschlusswert von (d), gefolgt von (f) Durchführen der Schritte (i) Klassifizieren des Messwerts als positives Testergebnis, wenn der Messwert gleich oder größer als der Ausschlusswert ist, oder (ii) Klassifizieren des Messwerts als negatives Testergebnis, wenn der Messwert kleiner als der Ausschlusswert ist, gefolgt von (iii) Aufzeichnen des Testergebnisses und Korrelieren des Testergebnisses mit der Information, die für die entsprechende Gewebeprobe aufgezeichnet wurde, gefolgt von (iv) Zuweisen des Testergebnisses zu der entsprechenden Gewebeprobe, (g) Wiederholen der Schritte (e) und (f), bis die Messwerte aller Gewebeproben verarbeitet sind.

A method for performing a high-throughput test to determine the presence of PrPsc in a tissue sample taken post mortem from brain the test comprising the workflow of (A) sample preparation, (B) sample treatment, (C) sample analysis, (D) controls, and (E) classifying the results of the analysis as positive or negative, whereby (A) comprises the steps of (a) providing in a standardized format a rack with a set of individually labeled containers, whereby the container set comprises a subset for control reactions, or control containers, to be processed as provided in (D) and a subset of containers for sample analysis or analysis containers (b) providing within each analysis container (i) 3 to 6 spherical beads, whereby each bead weighs between 50 mg and 100 mg, and (ii) a volume of homogenization buffer, whereby the homogenization buffer contains a proteolytic enzyme capable of effecting proteolysis in the presence of a chaotropic agent; (d) providing a tissue sample from brain, whereby the tissue sample is identified by a label containing unique information defining the origin of the tissue sample; (e) performing the steps of (i) recording the label of the tissue sample, (ii) transferring the tissue sample into an analysis container, (iii) recording the label of the analysis container, (iv) correlating the recorded information of step (i) with the recorded information of step (iii), (v) repeating steps (i), (ii), (iii), and (iv) until the desired amount of analysis containers in the rack is filled with sample tissue; (f) performing the steps of (i) sealing the containers of the rack with sealing means, followed by (ii) agitating the rack with the containers using agitation means, whereby the agitation moves the beads from the bottom to the top of each analysis container, thereby homogenizing the sample tissue therein, followed by (iii) sedimenting tissue debris in the analysis containers, followed by (iv) opening the containers and aspirating out of each container an aliquot of supernatant. whereby (B) is to be performed after (A) and comprises the steps of (a) providing a conditioned microwell plate with each cavity containing as dry matter a predetermined amount of a chaotropic agent whereby the chaotropic agent is attached to the wall of the cavity; followed by (b) transferring the supernatants of (A) step (f) into the cavities of the microwell plate, whereby the transferred volume is selected such that dissolving the dry matter in each cavity results in a concentration of between 300 mM and 2 M of the chaotropic agent in the supernatant; followed by (c) dissolving the chaotropic agent; followed by (d) incubating the microwell plate at a temperature between 15°C and 50°C, thereby allowing proteolysis; followed by (e) inhibiting the activity of the proteolytic enzyme; followed by (f) increasing in the mixture in each well the concentration of the chaotropic agent to a value of between 3.5 M and 5 M; followed by (g) incubating the microwell plate under constant agitation at room temperature, whereby the components in the cavities are mixed, thereby providing treated samples. whereby (C) is to be performed after (B) and comprises the steps of (a) providing a detection microwell plate which is coated with streptavidin; (b) transferring an aliquot of each treated sample of (B) step (f) into a cavity of the detection microwell plate; followed by (c) adding to the aliquot a three- to ten-fold volume of detection solution containing a first and a second binding agent specific for two separate epitopes of unfolded PrP(27-30), whereby the first specific binding agent is biotinylated and the second specific binding agent is conjugated with a reporter enzyme; followed by (d) incubating the detection microwell plate under constant agitation thereby mixing the components in the cavities, and complexes of the specific binding agents and unfolded PrP(27-30) are allowed to form; followed by (e) removing the liquid from the cavities of the detection microwell plate and washing the cavities with washing buffer; followed by (f) adding reporter enzyme substrate solution to the cavities of the detection microwell plate and incubating the plate; followed by (g) performing the steps of (i) measuring in a cavity the turnover of the substrate as optical density (OD), thereby providing a measurement value for the cavity, followed by (ii) recording the measurement value, whereby an over-reading is recorded as OD = 4.0, (iii) correlating the recorded measurement value of (ii) with the information recorded for the respective tissue sample in (A) step (e) step (i), (iv) repeating steps (i) to (iii) until the measurement values with regard to all tissue samples are processed, thereby providing analysis data relating to the samples. whereby (D) comprises the steps of (a) providing a reagent containing a recombinantly produced soluble fusion protein comprising the amino acid sequences of (i) one or more soluble carrier polypeptides, (ii) one or more epitopes of PrP(27-30) targeted by the first specific binding agent, and (iii) one or more epitopes of PrP(27-30 targeted by the second specific binding agent; (b) before performing the steps of (A) step (f) and the subsequent workflow, performing the steps of (i) recording the information of the labels of a first amount of control containers of (A) step (a), followed by (ii) providing in the first amount of control containers an aliquot of the homogenization buffer of (A) step (b) step (i), thereby providing negative controls, followed by (iii) correlating the recorded information of (i) with the negative controls, (iv) recording the information of the labels of a second amount of control containers of (A) step (a), followed by (v) providing in the second amount of control containers an aliquot of liquid selected from the group consisting of homogenization buffer lacking the proteolytic enzyme and homogenization buffer additionally containing an effective amount of a protease inhibitor, thereby providing positive controls, followed by (vi) correlating the recorded information of (iv) with the positive controls, followed by (vii) dispensing a measured amount of control reagent into each control container, (viii) including the positive and negative controls in (A) step (f), (B), and (C) steps (a) to (f); (c) performing the steps of (i) repeating (C) step (g) steps (i) to (iii) for each cavity of the detection microwell plate which contains a negative control until the measurement values with regard to all negative controls are processed, (ii) correlating the recorded measurement values of (i) with the information recorded for the negative controls, thereby providing negative control data, (iii) repeating (C) step (g) steps (i) to (iii) for each cavity of the detection microwell plate which contains a positive control until the measurement values with regard to all positive controls are processed, (iv) correlating the recorded measurement values of (iii) with the information recorded for the positive controls, thereby providing positive control data. whereby (E) is to be performed after (A), (B), (C), and (D), and comprises the steps of (a) calculating the median of the measurement values of the positive control data [M(p)] provided by (D) step (c); (b) calculating the median of the measurement values of the negative control data [M(n)] provided by (D) step (c); (c) calculating the median of the measurement values of the analysis data [M(a)] provided by (C) step (g); (d) calculating a cut-off value; (e) comparing the measurement value of a tissue sample provided by (C) step (g) with the cut-off value of (d); followed by (f) performing the steps of (i) classifying the measurement value as a positive test result if the measurement value is equal or greater than the cut-off value, or (ii) classifying the measurement value as a negative test result if the measurement value is smaller than the cut-off value, followed by (iii) recording the test result and correlating the test result with the information recorded for the respective tissue sample, followed by (iv) assigning the test result to the respective tissue sample. (g) repeating steps (e) and (f) until the measurement values of all tissue samples are processed.

Verfahren zur Herstellung von polyklonalen Antikörpern gemäß den Ansprüchen 7 oder 9, enthaltend die Schritte Immunisieren eines geeigneten Organismus mit rekombinant hergestelltem N-terminalem proBNP, Isolieren der Antikörper, Screenen nach den reaktivsten Epitopen und Aufreinigung der Antikörper über Immunsorption an geeigneten Peptiden.

Process for producing polyclonal antibodies according to claims 7 or 9 comprising the steps immunizing a suitable organism with recombinantly produced N-terminal proBNP, isolating the antibodies, screening for the most reactive epitopes and purifying the antibodies by immunoadsorption to suitable peptides.

Die Herstellung von polyklonalen Antikörpern erfolgt bevorzugt mit den Schritten Immunisieren eines geeigneten Organismus wie beispielsweise Schafe mit rekombinant hergestelltem N-terminalem proBNP, Isolieren der Antikörper. Screenen nach den reaktivsten Epitopen und Aufreinigung der Antikörper über Immunsorption an geeigneten Peptiden.

The production of polyclonal antibodies is preferably performed according to the following steps: immunization of an appropriate organism like e.g. sheep with recombinantly produced N-terminal proBNP, isolation of the antibodies, screening for the most reactive epitopes and purification of the antibodies via immunosorption at suitable peptides.

Verfahren zur Herstellung von Fremdprotein in Hefe, Rekombinant DNS, Transformant.

Method for preparing foreign protein in yeast, recombinat DNA, transformant.