fluorescence microscopy

Maturation of pre-adipocytes (light and fluorescence microscopy)

Reifung der Pre Adipozyten (Licht und Fluoreszenz-Mikroskopie)

[0004] The case considered here refers to the combination of images acquired by means of interference contrast transmitted-light (ICT) microscopy and fluorescence microscopy.

In dem hier betrachteten Fall geht es um die Kombination von Bildern, die mittels Durchlicht-Interferenz-Kontrast-Mikroskopie (ICT) und Fluoreszenzmikroskopie aufgenommen werden.

Lipid accumulation (fluorescence microscopy)

Lipid-Ansammlung (Fluoreszenzmikroskopie)

Fluorescence Microscopy

Fluoreszenz-Mikroskopie

Multiphoton Fluorescence Microscopy

Fluoreszenz-Mikroskopie, Multiphotonen-

A method of laser scanning fluorescence microscopy by a two-photon excitation technique of a target material (20) containing a fluorescent component which is excitable by a photon of a characteristic energy to produce a fluorescence photon; by the steps of repetitively illuminating said material (20) with a beam of intense, subpicosecond pulses of monochromatic coherent laser light comprising photons of an energy less than the said characteristic energy; and focusing said illumination to a small focal volume (26) within said material (20) to produce an illumination intensity sufficiently high only at said focal volume to produce molecular excitation by simultaneous absorption of two of said incident illuminating photons to induce fluorescence in said fluorescent component, and detecting the fluorescence induced.

Verfahren zur Laserabtastfluoreszenzmikroskopie durch eine Zweiphotonen-Erregungstechnik eines Zielmaterials (20), das eine Fluoreszenzkomponente enthält, die durch ein Photon mit einer charakteristischen Energie erregbar ist, so daß ein Fluoreszenzphoton erzeugt wird; mit folgenden Schritten: das wiederholte Beleuchten des Materials (20) mit einem Strahl aus intensiven monochromen kohärenten Laserlichtimpulsen im Sub-Pikosekundenbereich, die Photonen mit einer Energie umfassen, die geringer als die charakteristische Energie ist; und das Fokussieren der Beleuchtung auf ein kleines Fokalvolumen (26) innerhalb des Materials (20), um eine Beleuchtungsintensität zu erzeugen, die nur am Fokalvolumen ausreichend hoch ist, um molekulare Erregung durch gleichzeitige Absorption von zwei der einfallenden beleuchtenden Photonen zu erzeugen, um in der fluoreszierenden Komponente Fluoreszenz hervorzurufen, und das Detektieren der hervorgerufenen Fluoreszenz.

Apparatus (10) for laser scanning fluorescence microscopy of a target material (20) said apparatus comprising: stage means (22) bearing target material (20) including a fluorescent component responsive to excitation by a photon of a characteristic energy to produce a fluorescence photon; focusing means (40,12) positioned to direct light toward said stage and having an object plane (18) in said target material (20) at said stage means (22); a repetitive source (16) of subpicosecond monochromatic coherent light pulses comprised of photons of energy less than said characteristic energy; detector means for detecting said fluorescence photons (54); means directing said coherent light pulses along an optical path including said focusing means (40,12), said focusing means (40,12) focusing said light pulses at a focal volume (26) on said object plane (18) to impinge on said target material (20) at said stage means (22) so that two-photon excitation induces said fluorescence photons in said fluorescent component, and means for directing said fluorescence photons from said focal volume (26) to said detector means (54).

Vorrichtung (10) für die Laserabtastfluoreszenzmikroskopie eines Zielmaterials (20), wobei die Vorrichtung umfaßt: Plattformmittel (22), die Zielmaterial (20) tragen, das eine fluoreszierende Komponente umfaßt, die auf Erregung durch ein Photon mit einer charakteristischen Energie so anspricht, daß sie ein Fluoreszenzphoton erzeugt; Fokussierungsmittel (40, 12), die so angeordnet sind, daß sie Licht zur Plattform lenken und eine Objektebene (18) im Zielmaterial (20) auf dem Plattformmittel (22) haben; eine repetitive Quelle (16) für monochrome kohärente Lichtimpulse im Sub-Pikosekundenbereich, bestehend aus Photonen mit einer Energie, die geringer als die charakteristische Energie ist; Detektormittel zum Detektieren der Fluoreszenzphotonen (54); Mittel, die die kohärenten Lichtimpulse einen optischen Weg entlang lenken, der die Fokussierungsmittel (40, 12) umfaßt, wobei die Fokussierungsmittel (40, 12) die Lichtimpulse in einem Fokaivolumen (26) auf der Objektebene (18) fokussieren, so daß sie auf das Zielmaterial (20) auf dem Plattformmittel (22) auftreffen, so daß Zwei-Photonen-Erregung die Fluoreszenzphotonen in der fluoreszierenden Komponente hervorruft; und Mittel, um die Fluoreszenzphotonen vom Fokalvolumen (26) zu den Detektormitteln (54) zu lenken.

An apparatus (10) for laser scanning fluorescence microscopy, comprising: stage means (15) and on said stage means a target material (14) including a fluorescent component responsive to excitation by a photon of characteristic energy to produce a fluorescence photon; at least one source (12) of subpicosecond coherent light pulses comprising incident photons of an energy approximately 1/n of said characteristic energy, wherein n is greater than or equal to three; means (20, 22, 24) for focusing coherent light pulses on said target material (14), thereby causing said target material simultaneously to absorb n incident photons and produce a corresponding said fluorescence photon; detector means (42, 50, 56) for detecting said fluorescence photon; and means (34,36,38) for directing said fluorescence photon to said detector means.

Vorrichtung (10) für Laserrasterfluoreszenzmikroskopie, die aufweist: eine Objekttischeinrichtung (15) und auf der Objekttischeinrichtung ein Targetmaterial (14), das eine Fluoreszenzkomponente enthält, die als Reaktion auf Anregung durch ein Photon mit der charakteristischen Energie ein Fluoreszenzphoton erzeugt; mindestens eine Quelle (12) von kohärenten Subpicosekunden-Lichtimpulsen mit auftreffenden Photonen von einer Energie, die etwa 1/n der charakteristischen Energie beträgt, wobei n größer oder gleich drei ist; eine Einrichtung (20, 22, 24) zur Fokussierung von kohärenten Lichtimpulsen auf das Targetmaterial (14), so daß das Targetmaterial gleichzeitig n auftreffende Photonen absorbiert und ein entsprechendes Fluoreszenzphoton erzeugt; eine Detektoreinrichtung (42, 50, 56) zum Nachweis des Fluoreszenzphotons; und eine Einrichtung (34, 36, 38), um das Fluoreszenzphoton zur Detektoreinrichtung zu richten.