liposome

These linear MPEG groups extend from the liposome surface creating a protective coating that reduces interactions between the lipid bilayer membrane and the plasma components.

Diese linearen MPEG-Ketten ragen aus der Liposomenoberfläche heraus und schaffen so eine Schutzschicht, die die Wechselwirkungen zwischen der Lipid-Doppelmembran und Plasmabestandteilen vermindert.

with a cationic liposome

mit einem kationischen Liposom

Therefore, we speculated that glucosylceramide interfered with NOX assembly via a biophysical mechanism. By studying liposome models of the plasma membranes, we observed that the addition of glucosylceramide significantly decreased the size of these vesicles (Fig. 5A). The size of a vesicle is a measure of curvature (equal to the reciprocal of the radius), in that a smaller vesicle is more curved. Therefore, we postulated that glucosylceramide interferes with NOX by perturbing the membrane, inducing positive curvature, which restricts subunit-subunit and subunitmembrane interactions (Fig. 5B).

Deshalb spekulierten wir, dass Glucosylceramid mit NOX-Montage über einen biophysikalischen Mechanismus gestört. Durch die Untersuchung Liposom-Modelle der Plasmamembranen, beobachteten wir, dass die Zugabe von Glucosylceramid signifikant verringert die Größe dieser Vesikel (5A). Die Größe eines Vesikels ist ein Maß der Wölbung (gleich dem Kehrwert des Radius), dass eine kleinere Vesikel ist gekrümmt. Daher postuliert, dass wir mit Glucosylceramid NOX stört durch Stören der Membran, der Herstellung einer positiven Krümmung, die Untereinheit-Untereinheit und subunitmembrane Wechselwirkungen (5B) einschränkt.

Liposome

Liposome

Liposome preparation and cellular transfection. Aliquots of lipids were made at appropriate ratios (Table 1), and dried to a film under a stream of nitrogen, then hydrated by addition of 0.9% NaCl to a final lipid concentration of 25 mg/ml. Solutions were sealed, heated at 60°C (60 min) and subjected to vortex mixing and sonicated until light no longer diffracted through the suspension. The lipid vesicle-containing solution was quickly extruded at 60°C by passing the solution 10 times through 100 nm polycarbonate filters in an Avanti Mini-Extruder (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL).

Liposomenzubereitung und zelluläre Transfektion. Aliquots der Lipide wurden in geeigneten Verhältnissen (Tabelle 1) hergestellt und zu einem Film getrocknet unter einem Strom von Stickstoff, dann durch Zugabe von hydratisierten 0,9% NaCl bis zu einer endgültigen Lipidkonzentration von 25 mg / ml. Die Lösungen wurden abgedichtet, erwärmt auf 60 ° C (60 min) und einer Vortex-Mischen und beschallt, bis kein Licht mehr gebeugt durch die Suspension. Die Lipid-Vesikel-enthaltende Lösung wurde schnell extrudiert bei 60 ° C, indem die Lösung 10-mal bis 100 nm Polycarbonat-Filter in einer Avanti Mini-Extruder (Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL).

Liposome size determination. Liposome suspensions were diluted 1:10 in 0.9% NaCl prior to size determination. Light scattering was used to quantify the size of liposomes using a Malvern Instruments Zetasizer Nano (Malvern, Worcestershire, United Kingdom).

Liposomengröße Bestimmung. Liposomen-Suspensionen wurden 1:10 verdünnt in 0,9% NaCl vor der Größenbestimmung. Die Lichtstreuung wurde benutzt, um die Größe der Liposomen mit einem Malvern Instruments Zetasizer Nano (Malvern, Worcestershire, United Kingdom) zu quantifizieren.

Liposome formulations were prepared from specific lipids, at particular molar ratios, prior to nano-sizing. 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOPC), 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSP C), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE ), 1,2-distearoyl- sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-(methoxy[polyethylene glycol]-2000) (PE G2000-DSPE ), 1,2-dioctanoyl-sn-glycero-3-phospho- L-serine (PS ), 1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane (DOTAP ), C6-ceramide (C6CER), C8-ceramide (C8CER), C8-ceramide- 1-succinyl[methoxy(polyethylene glycol)-750] (PE G750-C8CER), C8- glucosylceramide (GLUCER), C18-sphingomyelin (SM), cholesterol (CH), and D-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol (PDMP).

Liposomenformulierungen wurden aus spezifischen Lipiden hergestellt, bei bestimmten Molverhältnissen, vor der Nano-Sizing. 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholin (DOPC), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholin (DSP C), 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin (DOPE ), 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-(methoxy [Polyethylenglykol] -2000) (PE G2000-DSPE), 1,2-Dioctanoyl-sn-glycero-3-Phospho-L- Serin (PS), 1,2-Dioleoyl-3-trimethylammoniumpropan (DOTAP), C6-Ceramid (C6CER), C8-Ceramid (C8CER), C8-Ceramid-1-Succinyl [methoxy (polyethylenglykol) -750] (PE-G750 C8CER), C8-Glucosylceramid (GLUCER), C18-Sphingomyelin (SM), Cholesterin (CH) und D-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-Morpholino-1-propanol (PDMP).

Statistical analysis. One-way or two-way, analysis of variance (ANOVA), were used to determine statistically significant differences between treatments (p < 0.05). At least three independent experiments were performed for each condition. Post hoc comparisons of specific treatments were performed using a Bonferroni test. Unpaired t-tests were used to directly compare mean diameters of respective liposome formulations. All error bars represent standard error from the mean (SEM). All statistical analyses were carried out using GraphPad Prism 4 software (La Jolla, CA).

Die statistische Analyse. Einweg-oder Zweiweg-, Analyse der Varianz (ANOVA), wurden verwendet, um statistisch signifikante Unterschiede zwischen den Behandlungen (p